乳酸克鲁维酵母β－半乳糖苷酶的分离纯化及性质研究

乳酸克鲁维酵母(kluyveromyceslactis)经高压破壁后的粗提液，其β-半乳糖苷酶(e．c．3．2．1．23)比活力为5．56u／mg。经硫酸铵沉淀，丙酮沉淀，papma—sepharose4b柱层析后，乳糖酶比活力达370u／mg，纯化了66．2倍，sds—page鉴定为一条带，分子量85000da。酶作用的最适ph在6．4—6．8之间，最适温度40℃，50℃保温15min酶活丧失90％。以邻硝基苯一β一半乳糖苷(onpg)为底物的米氏常数为2．78mmoi／l。酶的正常水解产物半乳糖对酶活力有一定的抑制作用，核糖强烈抑制酶活力，fe2+、zn2+、cu2+、ag+、pcmb和nbs都能使酶活丧失。mg2+、mn2+和还原剂巯基乙醇的存在能提高酶活力。