人尿激酶原cdna在中国仓鼠卵巢细胞(ch0)中高效表达研究

通过构建高效表达载体，改进转染方法，与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在ch0细胞内高效表达了人尿激酶原(pr0-uk)cdna。首先将pro—ukcdna插入到srα启动子的下游，构建成表达质粒pmgl0102，在cos－7细胞内进行暂时性表达，结果表明此启动子的表达水平比sv40早期启动子高约5倍。然后将质粒pmg10102和psv2－dhfr线性化后用磅酸钙共沉淀法转染ch0－dhfr-细胞，经一系列筛选后获得20个能表达pro—uk的细胞克隆，纤维蛋白溶解平板法(fapa)测定表达水平为12．5—100iu／106cells／d．再经mtx加压共扩增，得到9株高表达细胞系，其中最高的表达水平达到400—500iu／10‘cells／d。2—3个月连续传代，表达水平未下降，表明细胞株是稳定的。westernblot分析证明细胞分泌的重组pro－uk具有与天然pro—uk相同的分子量，而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时，分泌的重组uk大部分为单链(60％以上)。