极端嗜热菌thermusthermophilushb8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶，从极端嗜热细菌thermusthermophilushb8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspc，并在大肠杆菌bl21(de3)和rosetta(de3)中进行表达，发现在rosetta(de3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应ph是7.0，37℃下在ph8～10的缓冲液中保温1h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75℃，酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h，75℃时为2.5h。重组酶的kmkg为7.559mmol/l，vmaxkg为0.086mmol/(l·min)，kmasp为2.031mmol/l，vmaxasp为0.024mmol/(l·min)。ca2+、fe3+、mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。