凝血靶向通用效应因子ttf/sa融合蛋白的表达及活性鉴定

制备凝血靶向通用效应因子ttf/sa融合蛋白，并鉴定其生物学活性。利用pcr技术构建ttf与链霉亲和素sa的融合基因，克隆至表达载体pet22b（+），在e.colibl21（de3）中表达，镍亲和层析柱纯化ttf/sa融合蛋白。凝血实验和fⅹ活化实验鉴定融合蛋白中ttf的活性，elisa鉴定融合蛋白中sa与生物素biotin结合的活性。获得序列正确的ttf/sa/pet22b（+）重组子，融合基因在e.colibl21（de3）中高效表达。纯化后的融合蛋白具有活化fⅹ、引起血液凝固的能力，且能与生物素结合。融合基因已成功在e.colibl21（de3）中表达，ttf/sa融合蛋白具有tf和sa活性。融合蛋白ttf/sa可作为通用效应因子，与生物素化的肿瘤组织血管特异性载体联用，实现选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的多点治疗