出血性大肠杆菌o157基因缺失疫苗株的构建及其免疫

出血性大肠杆菌o157感染是重要的新发食物源性传染病，主要致病特征之一是能引起人肠上皮细胞特征性的a/e损伤，a/e损伤主要是由lee致病岛所编码的毒力因子所引起，ler是lee致病岛毒力基因群的中心调节基因，对lee致病岛所编码的毒力因子有正调控作用。o157:h7另一个毒力因子是由整合到染色体上的原噬菌体编码的stx毒素。以o157:h786-24为始发菌株，利用自杀性质粒pcvd442和同源重组的原理构建了o157:h7的ler基因缺失突变菌株（缺失了ler基因中第73-351位的碱基，共279bp），并利用噬菌体消除技术筛选到消除了编码stx的原噬菌体dna的菌株，构建出了o157:h7ler/stx基因缺失突变弱毒菌株，并对该菌株的vero细胞毒性、小鼠模型的安全性以及乳鼠的被动免疫保护作用进行了研究。结果表明，o157:h7ler/stx基因缺失突变菌株丧失了对vero细胞的毒性作用，并丧失了对实验小鼠的致病性，具有良好的安全性。乳鼠被动免疫保护性实验表明，用该菌株免疫母鼠后，乳鼠通过吸吮母乳可以获得良好的被动免疫保护作用。因此本研究所构建的o157:h7ler/stx基因缺失突变弱毒菌株可作为预防eheco157:h7感染的疫苗候选株，为最终研究制出o157的基因工程菌苗奠定基础。