犬2型腺病毒通用载体的构建及鉴定

为了获得能够携带较大外源基因的犬2型腺病毒e3区缺失性载体，以犬2型腺病毒全基因组质粒ppolyⅱ-cav-2及e3区重组质粒pvax-e3为基础，缺失1381bp的e3区片段(92.6%的e3区全序列)，插入linker-nf(内含notⅰ、claⅰ、fseⅰ多克隆位点)，获得重组载体质粒ppolyⅱ-cav-2-δe3（nf）(31.9kb)。以ascⅰ和pmeⅰ双酶切，游离重组基因组，在脂质体lipofectaminetm2000介导下，转染mdck细胞系，获得了e3区缺失的重组病毒cav-2-δe3（nf）。通过病毒的形态学观察，血凝性、生长特性、感染性实验证明，该重组病毒与母源病毒没有差异。重组病毒cav-2-δe3（nf）可以作为载体表达外源基因，其外源基因插入片段不小于3.3kb。