北极狐g-干扰素cdna的克隆、表达及活性测定

为研究狐g-干扰素的生物学活性,应用反转录聚合酶链式反应(rt-pcr)从北极狐外周血淋巴细胞中扩增出g-干扰素(vuifn-g)cdna。序列分析表明vuifn-gcdna全长501bp,编码23个氨基酸的信号肽和144个氨基酸的成熟肽蛋白,与已发表的银黑狐和犬ifn-g核苷酸序列同源性为99.8%和99.4%;氨基酸同源性均为100%。应用原核表达系统高效表达北极狐g-干扰素成熟肽蛋白,sds-page和westernblotting分析表达的融合蛋白分子量约为19kd,以不溶性的包涵体形式存在。重组蛋白经纯化和复性,在vero和mdck细胞上可明显抑制vsv病毒的复制,并测出北极狐重组g-干扰素的活性单位分别为1.0×106u/mg和1.56×105u/mg,为进一步开发基因工程狐干扰素奠定基础。