ptd-npy融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

应用重叠延伸pcr方法扩增hiv-1tat蛋白转导结构域(ptd)与鼠源神经肽y(npy)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体ppiczaa,构建成重组表达质粒ppicza-ptd-npy。pcr和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶saci线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌gs115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行sds-page电泳,表明该系统成功表达了ptd-npy融合蛋白,westernblotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的ptd-npy融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。