arresten在烟草中的表达及其生物学活性分析

采用5￠端引入his-tag的引物从携带有arresten基因的质粒pca中扩增血管生成抑制因子arresten编码基因,构建其植物表达载体pcambiaarr并通过冻融法转化根癌农杆菌lba4404,获得携带目的基因的重组农杆菌。采用叶盘法以重组农杆菌转化烟草,在50mg/ml潮霉素b为选择压力下获得再生烟草植株,经过southern杂交、rt-pcr和westernblotting检测,获得稳定整合有arresten编码基因的烟草转基因植株。牛血管内皮细胞bce增殖抑制实验表明,采用镍离子螯合次氨基三乙酸亲和层析法从转基因烟草叶片中分离纯化的重组arresten蛋白具有明显的抑制牛血管内皮细胞增殖的生物活性。