从小麦-簇毛麦易位系tac文库中筛选hv-s/tpk基因

本实验室已经通过基因芯片技术筛选到一个白粉菌诱导后上调表达的抗病相关基因hv-s/tpk,并获得了它的全长cdna序列。利用hv-s/tpk的特异引物筛选小麦-簇毛麦6vs/6al易位系基因组可转化人工染色体(transformation-competentartificialchromsome,tac)文库,获得了阳性tac单克隆,并进一步获得了含有hv-s/tpkcdna序列的5160bp(genbankaccessionno.eu153366)的亚克隆。对亚克隆的序列分析结果表明,hv-s/tpk基因在起始密码子和终止密码子之间有3个内含子和4个外显子,4个外显子序列与簇毛麦上已得到的hv-s/tpk的cdna序列100%同源。对起始密码子上游序列分析结果表明,该基因的调控序列中,含有w-box、ocs-element等与抗病相关的元件。以tac克隆为探针与小麦-簇毛麦6vs/6al易位系有丝分裂中期染色体进行荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,fish),结果表明含有hv-s/tpk基因的tac克隆来自于簇毛麦。