兔多杀性巴氏杆菌c51-3株黏附蛋白的表达、纯化及其抗原性检测

应用pcr从兔多杀性巴氏杆菌c51-3株基因组dna中扩增出编码36kd黏附蛋白的cp36基因,将其克隆到pmd18-t载体并对插入片段进行测序。以重组质粒pmd18-cp36为模板,用pcr扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36,并克隆到原核表达质粒pqe30中,得到重组质粒pqe30-cpm36,转化大肠杆菌m15,在iptg诱导下表达融合蛋白cpm36,经ni2+-nta亲和层析纯化。dna测序结果表明cp36基因片段大小为1032bp,与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较,同源性在76.9%~100%之间。sds-page结果显示,表达分子量约为37kd的带有6×his标签的cpm36蛋白,与预期分子量相符。westernblotting结果表明,抗重组蛋白抗体分别能与cpm36蛋白和多杀性巴氏杆菌36kd蛋白发生特异性反应,证明原核表达蛋白具有抗原性,为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础。