人-牛异种克隆胚构建及其线粒体来源

通过人-牛异种核移植技术获得异种克隆囊胚,便于在不消耗人类卵母细胞的情况下从异种克隆胚中分离出人类干细胞。通过透明带下注射法将人胎儿成纤维细胞和牛耳成纤维细胞分别注入去核牛卵母细胞中构建异种和同种胚胎,并比较两者之间的融合率、卵裂率、8-细胞发育率以及囊胚率。并对处于2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚阶段的异种克隆胚的线粒体dna来源进行检测。结果表明,异种克隆胚体外各个阶段的发育率均低于同种克隆胚,尤其是8-细胞到囊胚阶段的发育率,以及囊胚率都显著低于同种克隆胚(p<0.05)。异种克隆胚在2-细胞到桑椹胚阶段检测到人、牛线粒体dna共存,囊胚阶段只检测到牛线粒体dna。结果表明:牛卵母细胞可以重编程人胎儿成纤维细胞,完成异种克隆胚植入前的胚胎发育,异种克隆胚由于核质相互作用的不谐调,影响其发育能力,使其囊胚率显著低于同种克隆胚。牛线粒体dna存在于植入前异种胚胎发育的各个阶段。异种克隆胚胎用于人类胚胎干细胞分离具有可行性。