细胞粘附分子p-selectin功能片段在cho细胞表面的锚定表达

为了筛选出针对细胞粘附分子p-selectin的特异性抗体,克隆了p-selectin功能性基因片段,使其通过糖基化磷脂酰肌醇(gpi)锚定表达于真核细胞的细胞膜上,以用作筛选的抗原。提取人血小板的总rna,rt-pcr扩增出p-selectin目的基因片段,同时用重叠延伸pcr的方法合成细胞膜锚定信号肽gpi基因;将二者按上下游顺序插入含有弱化neo基因的真核表达载体pmcew2中;并将构建的重组质粒pmcew2-gpi-p-selectin转染chodhfr-细胞,g418筛选获得阳性细胞株,利用elisa、免疫印迹和免疫荧光法检测p-selectin的表达。实验证实了p-selectin在细胞膜上获得稳定表达。为进一步进行抗p-selectin的特异性抗体的筛选提供了必要前提。