力生长因子在大肠杆菌中的表达及活性分析

mgf(mechano-growthfactor)是一种igf-1变体形式,研究发现该因子具有应力敏感性,并且具有促进肌肉肥大、再生以及神经损伤修复的功能。通过rt-pcr从拉伸刺激的人成骨细胞中克隆mgfcdna序列,并去除5'端9bp的序列,使n端缺少对肠激酶(enterokinase,ek)具有抑制作用的脯氨酸,将截短型mgf(des(1-3)mgf)cdna序列克隆入pet32a(+)质粒,构建重组表达质粒。重组质粒转化e.colibl21(de3),在30oc培养下以可溶形式表达融合蛋白trx/des(1-3)mgf,采用离子交换层析和ni2+金属亲和层析,获得纯度95%以上的融合蛋白。再对融合蛋白ek酶切,rphplc分离获得纯度达98%的des(1-3)mgf,sds-page电泳及质谱分析蛋白分子量与理论值相符。生物活性实验显示,所制备的des(1-3)mgf比des(1-3)igf-1更显著的促进mc3t3-e1细胞的增值和迁移。