硫霉素环化酶基因在变铅青链霉菌tk24中的表达及基因定位

将含有硫霉素环化酶基因的重组质粒p6bcl2转化变铅青链霉菌(streptomyceslividans)tk24，含有p6bcl2的转化子细胞抽提液分别与琉霉素生物合成阻断变株y，发酵液以及纯化的y。中间产物经过体外共培养可产生活性物质．化学分析表明与y，发酵液混合后产生的是硫霉素，与纯化的y。中间产物混合产生的是一种不稳定的活性物质。说明硫霉素环化酶基因在s.lividanstk24中得到了表达，其产物以y。中间产物为底物并弥补了y，中的缺陷。对p6bcl2中4．5kb外源片段进行了限制酶酶切分析，建立了酶切图谱．利用含硫霉素环化酶基因的s．lividanstk24转化子体外转化y，的应用体系，将硫霉素环化酶基因定位在0．9kbhinci—psti片段上，并证明了硫霉紊环化酶的活性与ipns同源片段无关。以上实验为进一步研究琉霉素环化酶基因的结构打下了基础。