sars病毒s和n蛋白抗原表位的基因合成、融合表达及纯化鉴定

通过计算机分析sars病毒n蛋白和s蛋白的氨基酸序列,初步确定含强抗原表位的n蛋白片段和s蛋白片段,共560个氨基酸。选择真核和原核生物均偏爱的密码子,化学合成全新的sars病毒n蛋白片段和s蛋白片段的基因序列,利用基因工程技术将两个基因片段串联,克隆至质粒pet28a(+)内的ncoⅰ/ecorⅰ位点,表达s蛋白片段和n蛋白片段的融合蛋白。将重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3),筛选获得了高效表达sars病毒s蛋白片段和n蛋白片段融合蛋白的工程菌,表达的sars病毒的融合蛋白约占菌体蛋白总量的30%左右,部分以可溶性形式存在。经离子交换柱和反相高压液相纯化获得了表达的融合蛋白,经初步鉴定,显示该融合蛋白有较好的抗原性和特异性.