鸡卵清蛋白基因第一内含子和3′-调控区对外源基因表达的调控作用

探明鸡卵清蛋白基因(ov)第一内含子和3′-调控区对目的基因表达水平的影响,为鸡输卵管表达载体的构建提供科学依据。用牛生长激素基因(bgh)polya序列替换鸡输卵管表达载体中ov3′-调控区,用限制酶消化法逐步删减第一内含子序列,获得5个表达人组织激肽释放(hk1)cdna的鸡输卵管表达载体,分别命名为pov2k、pov3k、pov4k、pov5k和pov6k。经翅静脉给产蛋鸡注射聚乙烯亚胺包裹的相同拷贝数重组载体,通过蛋清中酶活性定量检测评价不同载体的表达水平。结果表明:受控于3.0kbov5′-和3′-调控区的pov2k表达的重组酶活性明显高于用bghpolya替换3′-调控区的pov3k;无内含子的pov6k表达水平显著低于含不同长度第一内含子的pov3k、pov4k和pov5k,重组酶表达水平随第一内含子的缩短呈逐渐下降趋势。该试验结果表明ov第一内含子和3′-调控区对目的基因在鸡输卵管细胞中的表达具有正调节作用,应当包括在鸡输卵管表达载体中。