甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因dd-ace-2全长cdna的克隆和序列分析

利用rt-pcr、race技术克隆了甘薯茎线虫(ditylenchusdestructor)乙酰胆碱酯酶基因(dd-ace-2)cdna(genbank登录号ef583058),用dnaman5.0、mega3.0进行了序列分析。克隆的dd-ace-2基因cdna全长2425bp,包含一个2205bp的开放阅读框,编码734个氨基酸。dd-ace-2基因推导的氨基酸序列与南方根结线虫(meloidogyneincognita)、秀丽小杆线虫(caenorhabditiselegans)和动物寄生线虫胎生网尾线虫(dictyocaulusviviparous)ace-2的氨基酸序列同源性分别达48.0%、42.7%和42.1%。在推导的734个氨基酸残基的前体蛋白中,前面的701个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的分子量为79240.38d。在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基(ser291,glu442和his574)、胆碱结合位点trp(177),以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守;在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基,其中10个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守。与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示,甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与其它线虫乙酰胆碱酯酶ace-2同属一个支系。