猪白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测

通过rt-pcr方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pil-18)成熟蛋白基因的cdna,克隆到pgem-t载体,构建重组质粒pgem-t-il18,转化e.colijm109感受态细胞,取pcr和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定。测序结果表明,pil-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474bp,编码157个氨基酸。将其克隆到表达载体pgex6p-1中,构建重组质粒pgex-il18,转化e.colibl21感受态细胞,用iptg诱导表达。重组菌菌体裂解物sds-page可检测到相对分子质量为45kd的重组蛋白,占菌体总蛋白的28%左右,以包涵体形式存在。对包涵体进行洗涤,用mtt法测定表明,重组蛋白能明显刺激猪脾脏t淋巴细胞增殖反应的活性。