逆转录病毒载体介导的rna干扰稳定抑制肌肉生长抑制素gdf-8的表达

为将肌肉生长抑制素的干扰序列表达盒hu6-sigdf-8有效导入肌成纤维细胞c2c12中,以pav-hu6+27载体为基础构建逆转录病毒载体pxsn-hu6-sigdf-8,并使之与pvsv-g质粒共转染gp-293细胞,用包装出的病毒粒子感染宿主细胞c2c12,g418筛选稳定整合逆转录病毒的抗性细胞库。2周后,westernblotting和real-timepcr分析结果显示,细胞内源性的gdf-8基因的表达得到了有效的抑制;mtt法和细胞流式仪分析表明,g418抗性细胞得到了更有效的增殖,并且g0/g1期细胞数量减少了13.7%,s期细胞数量增加了14.9%。因此,逆转录病毒载体的rna干扰系统可以稳定抑制gdf-8基因表达,它将成为治疗肌肉萎缩疾病的一个强有力的工具。