基于易错pcr的假密环菌armillariellatabescensman47b-甘露聚糖酶耐高温定向进化

本研究利用易错pcr技术突变假密环菌armillariellatabescensman47β-甘露聚糖酶野生型基因,pcr产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pycα上连接,在大肠杆菌dh5α中扩增后电转入酿酒酵母saccharomycescerevisiae,构建了库容为104的初级突变体库,筛选得到耐高温最佳突变株m262。dns法测得80oc处理30min后最大酶活力为25u/ml,较之野生型最适条件酶活力提高了4.3倍。序列分析表明,突变体有3个碱基发生了突变:t343a/c827t/t1139c,相应的氨基酸改变为ser115thr/thr276met/val380ala,利用swiss-model数据库同源建模显示,这3个突变氨基酸分别位于第4个β折叠的第6个氨基酸、第6个α螺旋的第1个氨基酸、第10个α螺旋和第11个β折叠之间的转角。