罗伊乳酸杆菌甘油脱水酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

迅速升温的生物柴油投资热导致了其副产物甘油的大量积累,这一现状使得开发和利用甘油生产各种精细化工产品备受关注。本实验通过构建基因工程菌来生物转化甘油生产3-羟基丙醛,为甘油下游产品的开发开辟了一条新途径。3-羟基丙醛是一种重要的化学中间体,同时也是一种有效地抗菌剂和生物组织的固定剂,在化学工业中具有广泛的应用前景。实验主要利用甘油脱水酶n末端序列,并根据ncbi中公布的甘油脱水酶的氨基酸序列设计了一对克隆引物,并以菌株罗伊乳酸杆菌(lactobacillusreuteri)的基因组dna为模板进行pcr扩增,获得约为1.6kb的片段,将其克隆到t载体上进行测序,对测序结果进行分析,重新设计两端含有ecori和hindiii酶切位点的表达引物,利用pcr扩增得到了甘油脱水酶基因,该基因片段长度为1674bp,编码558个氨基酸。将所得片段定向克隆到pet28b载体中,转化至大肠杆菌bl21感受态细胞中,筛选阳性单克隆。经iptg诱导后,进行sds-page电泳,在约65kd处检测出一蛋白表达条带,另外还对该重组菌进行比活力测定,最高比活力可达1.14u/mg,比野生型菌株提高了86.88%。