重组黄杆菌肝素酶iii的纯化、表征及培养条件对酶生产的影响

肝素酶iii是一种特异性地裂解乙酰肝素的酶,在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体。为实现肝素酶iii的可溶性表达,利用谷胱甘肽-s-转移酶(gst)与肝素酶iii融合性能,通过构建相应的表达质粒pgex-heparinaseiii,在大肠杆菌中实现了肝素酶iii的可溶性表达。粗酶通过一步亲和纯化其纯度可达95%以上。通过对lb培养基摇瓶培养escherichiacolibl21的诱导时机、诱导剂用量、诱导时间等培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶iii融合蛋白的最适生产条件。通过对纯酶的最适反应温度、ph、ca2+浓度等一系列性质研究,确定了该酶的最适反应条件。