重组人白细胞介素21在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析

为了获得有活性的重组人白细胞介素21(rhil-21),本研究建立了在毕赤酵母(pichiapastoris)中分泌表达rhil-21的技术。首先,通过rt-pcr从人外周血淋巴细胞中扩增il-21cdna,克隆到酵母表达载体ppic9k中,构建了重组酵母表达载体ppic9k-hil21cdna;然后,线性化的载体转化毕赤酵母表达菌株gs115,经抗性梯度筛选获得了多拷贝重组酵母菌;加入甲醇诱导培养后,sds-page和westernblotting检测到培养液中有rhil-21的分泌表达,相对分子量约为16kd,elisa结果显示摇瓶表达量可达229.28mg/l;表达上清经阳离子交换介质spsepharosefastflow纯化后,目的蛋白纯度达到95%。细胞增殖试验结果显示该rhil-21联合刀豆蛋白a(cona)对人淋巴细胞的增殖具有显著的促进作用。本研究首次成功在毕赤酵母表达系统中分泌表达了有生物活性的rhil-21,为相关疾病免疫治疗的研究奠定了基础。