单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及其单克隆抗体的制备

为了深入研究单核增生性李氏杆菌(lm)致病机理,从其基因组中克隆李氏杆菌溶血素基因hly,并将其与原核表达载体连接在大肠杆菌bl21中表达携带his标签的李氏杆菌溶血素(llo)融合蛋白,经镍柱纯化得到重组llo蛋白作为免疫原并免疫小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得3株稳定分泌针对llo蛋白单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为anti-llo1、anti-llo2、anti-llo3;经elisa测定其细胞培养上清效价分别为1:3.6×104、1:6.4×104、1:1.6×104,腹水效价分别为1:2×107、1:2×107、1:1×107;亲和力解离常数(kd)分别为6.18×10-11、7.50×10-11、6.27×10-11;3株单抗的igg亚类均为igg1。经westernblotting鉴定证明,该3株抗体均能特异地识别李氏杆菌llo蛋白,该单抗的制备为深入研究lm的致病机理奠定了基础。