长角血蜱卵泡抑素相关蛋白的定性

参照genbank中长角血蜱致病性okayama株卵泡抑素基因的核苷酸序列(genbankaccessionno.dq248886)设计合成一对引物,从本实验室保藏的单克隆洁净长角血蜱饥饿成蜱中快速提取总rna,通过rt-pcr扩增出814bp的卵泡抑素基因,序列比对结果显示:与长角血蜱致病性okayama株的核苷酸序列及氨基酸序列一致性分别为97.8%和99%,将其亚克隆到表达载体pgex-4t-1中进行表达,gst融合重组蛋白预期分子量为57kd。表达重组蛋白经magnegsttm蛋白纯化系统纯化后作为抗原分别与抗不同发育阶段长角血蜱(卵、幼蜱、若蜱、成蜱)多克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,结果表明:与长角血蜱卵制备的多克隆抗体有很强的免疫反应,而与其他发育阶段(幼蜱、若蜱、成蜱)饥饿长角血蜱制备的多克隆抗体反应性很弱。以上结果表明:长角血蜱卵泡抑素蛋白在长角血蜱产卵及卵成熟发育时期的表达水平较其他发育阶段(幼蜱、若蜱、成蜱)的蛋白表达水平高。