基于核酶技术的人线粒体色氨酸trna的高效转录及其活性鉴定

利用t7rna聚合酶(t7rnapolymerase,t7rnap)的体外转录方法因其简便、高效而在rna制备中得到广泛应用,但该法由于t7rnap的启动子跨越转录起始位点而会导致转录产物多出附加序列;如果去掉t7启动子的转录起始位点,则会严重降低t7rnap的转录活性。本实验很好地消除了以上弊端,将t7rnap的高效转录系统与核酶高度专一的自剪切技术相结合,成功构建了一种不影响转录效率的体外转录方法,而且转录后核酶能够在设计的特定位点进行自剪切并释放出目的rna,得到了活性达113.6pmol/μg的人线粒体色氨酸trna(hmtrnatrp(uca))。该方法转录效率高、重复性好,适合rna的大量精确制备。