以新霉素抗性基因突变体为筛选标志的真核表达载体的构建

新霉素抗性基因(neo)是真核表达载体的常用筛选标志neo基因编码新霉素磷酸转移酶ⅱ（nptⅱ），能催化g418、卡那霉素等多种氨基糖苷抗生素分子磷酸化而使之失去抗菌活性。通过对真核表达载体的筛选标志基因neo进行定点突变，以降低nptⅱ的活性，然后用含neo突变体的真核表达载体pmdna构建荧光素酶表达质粒，稳定转染cho-k1细胞，发现表达荧光素酶的阳性细胞比例达到95%，其中高表达细胞集落的筛选率明显高于对照组。