蜘蛛拖丝蛋白基因的构建及在大肠杆菌中的表达

蜘蛛大壶腹线产生的拖丝是非常优良的纤维蛋白,具有独特的强度和弹性。基于拖丝蛋白高度重复序列和部分cdna序列,合成蜘蛛拖丝蛋白基因单体,通过头尾相连的构建策略,得到拖丝蛋白多聚体,与原核高效表达载体pet30a(+)连接,转化大肠杆菌blr(de3),用iptg诱导表达。表达产物经his.bind树脂金属螯合亲和层析一步纯化,纯度达90%以上,表达量为20mg/l。sds-page和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为37kd,其值与氨基酸组分分析结果与理论推算值基本符合。