蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

ax15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hcntf突变体。在巴斯德毕赤酵母中表达时ax15易发生降解。氨基酸序列分析表明降解位于由12和13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后。根据kex2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从rr变为rk，构建了kex2抗性的ax15突变体ax15（r13k）。ax15（r13k）的稳定性得到了显著的提高，在诱导100h后也未发生降解。利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度>90%的ax15（r13k）。tf-1细胞存活实验表明ax15（r13k）具有与ax15相同的生物学活性。蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体可能具有更好的体内稳定性，在临床应用上具有潜在的优势。