加载hcmv抗原肽的hla-a*0201单体及其四聚体制备和鉴定

细胞毒t淋巴细胞(ctl)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用，因而特异性ctl的检测相当重要；而过去检测ctl的方法都是间接的，最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性ctl的有效而特异的方法，成为目前研究t细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序，利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒(hcmv)抗原肽的hla-a2四聚体，具有特异性结合ctl活性。hla-a*0201重链基因是通过rt-pcr方法从hla-a2+供者白细胞中克隆，进而以pcr方法构建在羧基端融合生物素化酶bira底物肽(bsp)的hla-a*0201(a2)重链胞外区原核表达载体,a2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达，主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性a2单体是a2胞外区在轻链β2微球蛋白和hla-a2限制性hcmvpp65495-503抗原肽(nlvpmvatv，nlv)存在时通过稀释法复性获得，以bira对其进行生物素化，然后以阴离子交换树脂纯化，得到的纯化a2-nlv单体与streptavidin_pe按4:08比例混合形成四聚体，结合程度在85％以上，流式细胞仪分析显示该四聚体具有与hla-a2+供者的特异性ctl结合活性。总之，这种简化的四聚体制备程序，不仅有利于该技术的推广，为特异性t细胞免疫研究建立必要的技术平台，而且a2-nlv四聚体在临床监测cmv特异性ctl水平等方面也有应用价值。