茎环法rt-qpcr定量检测细胞抗猪瘟病毒sirna的表达

rnai(rnainterference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但sirna(smallinterferingrna)的定量检测仍是评价rnai抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗csfv特异sirna分子(sin1和sin2)在细胞中的表达水平，设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的sirna特异茎环引物(slp-n1-6和slp-n2-8)，成功地建立了最优的sin1和sin2的茎环法rt-qpcr检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度，能检测出102至108个拷贝的sirna，至少可达7个数量级的检测范围，平行性好(rsq=0.999)，扩增效率高(eff.=98.2％)。茎环法rt-qpcr能准确地定量检测抗csfv的pk-15细胞克隆的sin1/sin2表达水平，可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和tcid50等技术定量评价rnai抗csfv的有效性，为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。