新型羟基化酶基因的克隆及其洛伐他汀转化的应用

无锡他汀由洛伐他汀经拟无枝酸菌amycolatopsissp.cgmcc1149羟基化而来。为获得该转化过程中的关键酶——羟基化酶，运用简并pcr和sefapcr技术，从amycolatopsissp.cgmcc1149中克隆获得长度为1212bp的新型羟基化酶基因，并实现其在大肠杆菌中表达。blast序列分析表明该基因属于细胞色素p450基因超家族，并可编码一个含403氨基酸的蛋白，其分子量为44.8kda。二级结构预测结果表明：该蛋白包含有氧结合区、离子对结合区和血红素结合区等p450典型功能区。同时文中利用nadh、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶建立了体外酶催化功能验证系统，首次实现无锡他汀转化底物洛伐他汀的体外羟基化。该结果为具有我国独立知识产权的无锡他汀大规模制备奠定了基础。