毕赤酵母表达gp96-scfv抗体及生物活性测定

旨在利用毕赤酵母分泌表达gp96-scfv抗体，纯化后得到能特异性结合gp96抗原的小分子抗体片段(scfv)。根据gp96-scfv抗体基因序列，合成gp96-scfv抗体基因序列，将gp96-scfv抗体序列克隆到毕赤酵母表达质粒ppiczα-a，线性化的重组表达载体电转化到毕赤酵母x33，甲醇诱导目的蛋白表达，通过亲和层析法纯化目的蛋白，并以sds-page和westernblotting进行鉴定。通过westernblotting、immunofluorescence、elisa、facs方法对gp96-scfv抗体的生物活性进行了检测。结果成功地构建了分泌表达抗gp96蛋白scfv抗体的毕赤酵母菌，每升毕赤酵母菌培养上清经纯化可获约50mggp96-scfv抗体，所获抗体其分子量大约为15kda，具有与gp96抗原特异性结合的活性。本研究通过毕赤酵母菌成功表达了gp96-scfv抗体，生物活性westernblotting、immunofluorescence、elisa、facs分析表明该抗体能特异性结合gp96。