极耐热性乳酸脱氢酶高效表达、纯化及酶学性质

从海栖热袍菌扩增出编码乳酸脱氢酶的基因并将其插入热激载体phsh构建表达质粒，在大肠杆菌escherichiacoli中进行表达产生极耐热性乳酸脱氢酶tm-ldh。基因表达产物通过热处理，可以一步获得接近电泳纯的重组酶。酶学性质研究表明，tm-ldh的最适反应温度为95℃，最适ph7.0；纯酶在90℃的半衰期为2h，在ph5.5–8.0之间最稳定；sds-page结果显示分子量为33kda，与理论推算值相吻合。以丙酮酸和nadh为底物时，相对于丙酮酸的km值1.7mmol/l，vmax为3.8×104u/mg；相对于nadh的km值7.2mmol/l，vmax值为1.1×105u/mg。tm-ldh基因在t7载体中未能实现高效表达，但是在热激载体phsh中得到了可溶性超量表达，表达水平达到340mg/l。该酶在65℃反应条件下，活性达到最高活性的50％，并能保持活性不变，这使该酶能够与常温酶匹配，在辅酶nad再生体系的建立中具有广泛的用途。