鼠脑驱动蛋白的表达、纯化和结晶

驱动蛋白是一类利用水解atp为adp和磷酸的过程中释放的能量沿微管系统运动的蛋白。为了研究atp中储存的化学能是如何转化为驱动蛋白的机械动能，鼠脑驱动蛋白的相关n-端区域在bl21-codonplus(de3)-rp感受态大肠杆菌细胞中大量地表达。通过sp-强阳离子交换色谱和分子筛色谱的两步骤纯化，蛋白最终产量高达10mg/l细胞培养液，蛋白纯度可以达到95%以上。纯化的蛋白具有水解atp酶的活力，并与驱动蛋白抗体有特异性的反应。驱动蛋白可以在如下条件结晶：1.7mol/l(nh4)2so4,500mmol/lnacl,20%glycerol。晶体衍射的分辨率可以达到2.0?。