金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve在毕赤酵母gs115中诱导型和组成型表达

为获得稳定来源并且具有生物学活性的重组金针菇免疫调节蛋白(fip-fve)，将fip-fve基因转至毕赤酵母gs115中进行诱导型和组成型表达。用pcr方法从金针菇子实体基因组dna中扩增fip-fve基因，连接至ppic9构建诱导型表达载体ppic9-fip-fve，从毕赤酵母基因组dna中扩增三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pgap)，替换ppic9-fip-fve上乙醇氧化酶启动子(paox1)构建组成型表达载体ppic9-pgap-fip-fve。将线性化的两种表达载体用peg法转化毕赤酵母gs115，经组氨酸缺失培养基筛选和酵母菌落pcr鉴定后进行表达。结果表明，重组fip-fve在以甲醇(1%，v/v)为碳源进行诱导型表达4d达到最高，粗蛋白表达量为158.2mg/l，在以葡萄糖(10%)和甘油(1%，v/v)为碳源进行组成型分别在表达第4天和第5天达到最高，粗蛋白分别为46.3mg/l和29.5mg/l。sds-gage及westernblotting证明重组fip-fve已正确表达，血细胞凝集活性检测初步证明重组fip-fve具有良好生物学活性。