唾液乳杆菌bsh1及其突变体的底物特异性

为了解析胆盐水解酶催化中心中关键氨基酸位点与其底物特异性的关系，以大肠杆菌pet-20b(+)表达系统为分子改造平台，采用理性设计，结合氨基酸定点突变的方法，成功构建了唾液乳杆菌lactobacillussalivarius胆盐水解酶bsh1的7种突变体。通过对比l.salivariusbsh1及其突变体对6种结合胆盐的底物特异性表明，7种突变体对不同的结合胆盐的水解活性有所改变。结果说明，cys2和thr264分别是bsh1催化tca和gca的关键残基，且对酶的催化活性的保持具有关键作用。其中，高保守性的氨基酸位点cys2不是bsh1唯一的活性位点，而其他突变的氨基酸位点可能作为bsh1的结合位点参与了底物的结合，也可能影响了底物进入bsh1活性中心的通道或底物结合口袋的体积与形状，进而影响了bsh1对不同结合胆盐的水解活性。