人羊水祖细胞的分离和基因修饰

探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和fix基因修饰后的效果，为血友病b的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落，经培养传代后，通过第3代慢病毒载体将hfix导入该细胞，经酶联免疫反应(elisa)等方法检测hfix的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样，倍增时间为39.05h，该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子ssea4，tra1-60，在基因水平还可检测到nanog，oct4，sox2mrna的表达。羊水祖细胞导入hfixcdna后，能合成并分泌hfix蛋白，传代后48h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%，凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期，为50.35%±5.42%，凝血活性可达45.34%±4.67%。elisa检测显示转染后的羊水细胞表达的hfix蛋白的水平呈现基本稳定趋势，波动幅度较小；同时检测fix凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞，转染了hfix的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hfix蛋白，为血友病b产前治疗的新方法提供了实验依据。