戊型肝炎病毒iv型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质

采用pcr技术扩增基因iv型hev(hepatitisevirus，hev)开放阅读框2(openreadingframe2，orf2)的缺失突变体(aa384-606)，亚克隆到表达载体后，转化到大肠杆菌中进行诱导表达，表达蛋白命名为rp24。sds-page和免疫印迹实验表明，rp24获得了高效表达，且和单克隆抗体15b2具有强的反应活性。rp24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后，免疫印迹实验表明，纯化rp24能与抗hevorf2中和单克隆抗体8c11以及he(hepatitise，he)阳性血清发生很强的免疫反应性，说明rp24上具有构象型中和表位，模拟了hev衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明，rp24的平均水化半径为7.48nm；纯化rp24免疫动物实验表明，rp24具有强的抗原性，小鼠阳转周期短，抗体持续时间长；纯化rp24作为包被抗原检测he阳性血清和阴性血清，结果显示rp24对he阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗hev-igg检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明，具有较好免疫反应性和免疫原性的rp24获得了高效表达，该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位，为进一步研究基因i型和基因iv型hev感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。