osf1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性

为了研究人成骨细胞刺激因子(humanosteoblast-stimulatingfactor,osf-1)的生物学活性，构建osf-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的osf-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因，并克隆至毕赤酵母分泌表达载体ppic9k，构建重组表达质粒ppic9k/osf-1，线性化后电转化酵母宿主菌gs115，构建p.pastorisgs115/ppic9k/osf-1，经md、g418-ypd平板和pcr法筛选，获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃，经1%的甲醇诱导表达96h，重组蛋白的表达量达到最大。经sds-page电泳分析所表达的重组蛋白约为18kda，与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经sp-sephadexc-50离子交换层析进行纯化，得到纯度达98%以上的osf-1。westernblotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的osf-1能促进鼠成骨细胞mc3t3-e1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的osf-1，为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。