检测sortasea酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统

利用分子进化技术对sortasea酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点，为了高效筛选特定催化活性的sortasea酶突变体，需要建立一种能够快速准确鉴定sortasea酶活性的方法。为此，设计了由gfp-lpetg蛋白和gggyk-biotin组成的新型报道底物系统。利用重组基因工程技术，成功制备gfp-lpetg蛋白，野生型sortasea酶及近期报道的一个高活性突变型sortasea酶。以gfp-lpetg及gggyk-biotin为报道底物建立连接体系，结果显示，连接反应动力学可直接通过sds-page凝胶电泳法精确测定。用此连接体系比较野生型与突变型sortasea酶催化的连接反应效率，证实高活性突变酶具有野生酶无法比拟的高催化活性。此报道系统简单快速灵敏，可应用于系统的筛选，为后续进一步定向优化sortasea酶奠定了基础。