猪cuznsod基因启动子的克隆鉴定及分析

猪铜锌超氧化物歧化酶(cuznsod)是一种重要的抗氧化酶，其功能已被广泛研究，但cuznsod基因的转录调控尚不明确。为了研究猪cuznsod基因的核心启动子区域，并对其转录调控机制进行探讨，运用pcr方法从猪基因组克隆cuznsod基因5′上游调控区853bp的片段，然后通过巢式pcr方法获得5′末端逐渐缺失的启动子系列片段，并将这些片段定向插入到荧光素酶报告基因表达载体(pgl3-basic)中。瞬时转染小鼠胚胎细胞(nih/3t3)，利用双荧光素酶报告基因检测不同长度启动子活性。检测结果显示，在cuznsod基因5′上游调控区-87bp和-266bp处分别存在2个潜在转录起始位点，-383bp~+67bp启动区活性最强，进一步缺失分析发现-75bp~-32bp区域内含有猪cuznsod基因转录所必需的基础启动子序列，其中存在多个潜在的转录因子结合位点，研究结果提示这些转录因子结合位点可能是参与cuznsod基因转录的重要调控序列。