表达o型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组prrsv的构建及其鉴定

以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆(rhun4-f112)作为载体，将o型口蹄疫病毒(fmdv)vp1基因的421~480nt(141~160aa)和598~639nt(200~213aa)两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变pcr的方法插入nsp2中的508~532位缺失区域，经体外转录后转染至bhk-21细胞中培养36h，将上清接种至marc-145细胞中培养，并在marc-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经rt-pcr扩增，mluⅰ酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的mluⅰ分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在marc-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rprrsv-f112-o/vp1ep。rprrsv-f112-o/vp1ep能够在marc-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的tcid50=-log10-6.75/0.1ml,且在marc-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rhun4-f112(△508-532)相似，但明显高于rhun4-f112病毒。