金黄色葡萄球菌蛋白a(spa)z结构域串联体的克隆、表达和筛选

筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白a(spa)用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白a(spa)的z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因，将目的基因分别克隆至pet-22b表达载体并转化至大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞，获得不同串联个数的z结构域基因工程菌，经诱导表达和ni2+亲和层析纯化得到z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质，对人免疫球蛋白g(igg)进行分离纯化。分析比较z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明，构建的z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白，制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人igg。增加z结构域串联数，重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高，其中，重组四串体蛋白产量大(160mg/10g湿菌体)，对抗体的吸附载量高(34.4mg人igg/ml胶)，更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。