纤维连接蛋白c端肝素结合域多肽在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定

为在毕赤酵母中表达纤维连接蛋白c端肝素结合域(fibronectinc-terminalheparin-bindingdomainfnchbd)多肽并研究其功能，通过pcr技术扩增fnchbd目的基因，将目的基因与t载体连接，经测序正确后，插入pao815sm酵母表达载体增加基因拷贝数，然后酶切克隆入酵母表达载ppic9k；将重组质粒sali酶切线性化后转化毕赤酵母菌株，筛选工程菌，经甲醇诱导表达，用sds-page检测发酵上清液，表明有重组蛋白fnchbd多肽的高表达，表达产物通过离心、超滤、离子交换层析纯化，纯化产物通过sds-page、westernblotting印迹、质谱及肝素亲和层沉析对表达产物进行鉴定。结果表明利用酵母工程菌成功表达和纯化了fnchbd多肽，多肽的分子量接近32kda，纯化产物的纯度可达95％以上，能被fn多克隆抗体特异识别且具有多肽肝素结合活性，为后续结构及功能的研究奠定基础。