水稻中cry1ah1基因密码子优化方案的比较

cry1ah1基因是本实验室克隆的具有自主知识产权的模式基因，对鳞翅目害虫水稻二化螟等具有高毒力，具有较好的应用前景。为提高cry1ah1基因在水稻中的表达量，探讨密码子使用频率对基因表达的影响，依据水稻密码子使用频率设计5种不同的优化方案，提高gc含量并去除剪切信号等不稳定因素后合成cry1ah1基因杀虫活性区域。优化后的基因在大肠杆菌rosetta(de3)中正常表达了65kda蛋白，表达蛋白对2龄小菜蛾和水稻二化螟初孵幼虫都具有良好的杀虫活性。优化的基因转化水稻日本晴后，pcr阳性率达到87％以上，实时荧光定量rt-pcr和elisa分析表明全部采用最高频率密码子的优化方案效果最好，cry1ah蛋白平均表达量占可溶性蛋白的0.104％。