雏番鸭细小病毒vp3基因的原核表达及增殖病毒的检测

近年来，番鸭细小病毒出现新的流行趋势，估计与病毒基因变异有关，因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒(mdpv)2012年分离株saas-shnh的全基因序列，设计了一对特异性引物，利用pcr技术扩增全长vp3基因，经鉴定正确后，进行同源性比对分析，同时将其克隆到pet28a载体，构建成pet28a-vp3原核表达载体，经转化及iptg诱导后，sds-page电泳和westernblotting分析，表达出与预期大小相符的63.1kda的蛋白，该蛋白可与临床采集的免疫过mdpv的番鸭血清结合，说明该蛋白可用于mdpv的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔源mdpv-vp3蛋白的多克隆抗体，制备的兔源血清能够与mdpv疫苗弱毒株及j3d6株vp3蛋白发生特异结合；mdpv感染原代鸭胚成纤维细胞(def)后，利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(ifa)分析，在def细胞核和细胞质内均能检测到vp3蛋白，表明利用vp3蛋白制备的抗血清可以用于mdpv免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后mdpv的快速检测提供了技术基础。