谷氨酸棒杆菌nad激酶的过表达对l-异亮氨酸合成的促进作用

nad激酶催化辅酶ⅰ[nad(h)]发生磷酸化，转变成辅酶ⅱ[nadp(h)]，而还原态辅酶ⅱ(nadph)是l-异亮氨酸合成的必要辅因子。为了提高nadph的供应，首先克隆了谷氨酸棒杆菌nad激酶基因ppnk，并利用大肠杆菌-棒状杆菌诱导型穿梭表达载体pdxw-8和组成型穿梭表达载体pdxw-9在l-异亮氨酸合成菌——乳糖发酵短杆菌jhi3-156中进行表达。摇瓶发酵后，ppnk诱导表达菌jhi3-156/pdxw-8-ppnk的nad激酶酶活(4.33±0.74u/g)比pdxw-8空载菌提高了83.5％，辅酶ⅱ与辅酶ⅰ的比例提高了63.8％，l-异亮氨酸产量(3.86±0.12g/l)提高了82.9％；ppnk组成表达菌jhi3-156/pdxw-9-ppnk的nad激酶酶活(7.67±0.65u/g)比pdxw-9空载菌提高了2.20倍，辅酶ⅱ与辅酶ⅰ的比例提高了1.34倍，nadph含量提高了21.7％，l-异亮氨酸产量(2.99±0.18g/l)提高了41.7％。这说明nad激酶有助于辅酶ⅱ的供应和l-异亮氨酸的生物合成，这对于其他氨基酸的生产也有一定的参考依据。