白菜与甘蓝之间体细胞杂交种获得与遗传特性鉴定

为拓宽白菜育种的基因资源，改良白菜品质，以白菜(brassicacampestris，2n=20，aa)和甘蓝(b.?oleraceal.var.capitata，2n=18，cc)的子叶和下胚轴为材料分离、制备原生质体。采用40％聚乙二醇(polyethyleneglycol，peg)进行原生质体融合。融合细胞在以0.3mol/l蔗糖、0.3mol/l葡萄糖为渗透稳定剂，附加1.0mg/l2,4-d+0.5mg/l6-苄氨基嘌呤(6-ba)+0.1mg/l1-萘乙酸(naa)+1.0mg/l激动素(kinetin，kin)的改良k8p培养基中培养并诱导细胞分裂。小愈伤组织经增殖培养后在ms+0.2mg/l玉米素(zeatin，zea)+1mg/l6-ba+0.5mg/lkin+0.4mg/lnaa的固体分化培养基上诱导出不定芽。30d后再转入ms基本培养基,获得完整的再生植株。将生根的植株转移到花盆，并对其杂种性质进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。结果表明，经细胞融合分裂出的320个愈伤组织中，获得了35棵再生植株，其再生率达10.94％。形态学观察显示，绝大多数再生植株的叶面积较大，株型和叶型为两种杂交亲本的中间型，部分植株的叶片浓绿、肥厚。染色体计数结果显示，36.4%的再生植株染色体数为2n=38；36.4%的再生植株的染色体数为2n=58~60；27.2%的再生植株的染色体数为2n=70~76,超过两个融合亲本的染色体数的总和。流式细胞仪测定dna含量显示，再生植株dna含量变化比较大，其结果与染色体鉴定结果相吻合。随机扩增多态性dna(randomamplifiedpolymorphicdna，rapd)和基因组原位杂交(genomicinsituhybridization，gish)分析结果证明再生植株具有双亲基因组。体细胞杂种花粉育性比较低，杂交、回交后其育性逐渐获得恢复，与白菜回交后代逐渐恢复了育性。通过体细胞杂交和回交、杂交获得了形态变化广泛的个体，为白菜的品种育种提供多样的种质资源。